JJF1527-2015

×××× 本规范主要起草人: 参加起草人: 全国生物计量技术委员会 J J F1527——×××× 1 目录引言... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... I 1 范围..................................................................................................................1 2 引用文件............................................................................................................1 3 术语和计量单位...................................................................................................1 3.1 聚合酶链反应......................................................................................................1 3.2 聚合酶链反应分析仪.............................................................................................1 4 概述.....................................................................................................................1 5 计量特性...............................................................................................................2 6 校准条件...............................................................................................................3 6.1 校准设备及标准物质..........................................................................................3 7 校准项目和校准方法................................................................................................3 7.1 校准条件............................................................................................................3 7.2 温度示值误差......................................................................................................3 7.3 温度均匀度和波动度..........................................................................................5 7.4 升降温速率......................................................................................................6 7.5 荧光检测性能......................................................................................................7 7.6 样本示值误差、样本线性和样本区分度........................................................................8 8 校准结果表达.........................................................................................................12 9 复校时间间隔.........................................................................................................12 附录A PCR 仪温度探头数量和布点要求...............................................................13 附录B 荧光检测性能试验的孔位排布........................................................................13 附录C PCR 仪样本类型排布............................................. .............................. 14 附录D 两组数据显著差异的判断方法...........................................................................14 附录E 温度示值误差测量结果的不确定度评定示例............................................................16 附录F 样本示值误差不确定度评定示例........................................................................18 全国生物计量技术委员会 JJF1527——202× 2 附录G 校准原始记录参考格式....................................................................................20 附录H 校准证书(内页)参考格式............................................. ....................................21 全国生物计量技术委员会 J J F1527——×××× 3 引言本规范参考GB/T 42753-2023 《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》、JJF 1030-2023 《温度校准用恒温槽技术性能测试规范》、ISO 22174:2024《食源性病原体PCR检测技术规范第1部分:通用要求及定义》、ISO 20836:2021《食源性病原体PCR检测技术规范第2部分:PCR性能试验要求》、YY/T 1173-2010《聚合酶链反应分析仪》对 JJF1527-2015 《聚合酶链反应分析仪校准规范》进行了修订。 与JJF1527-2015相比,除编辑性修改外,主要技术内容变化如下: ——规范名称修改为“聚合酶链反应分析仪(PCR仪)校准规范”(见封面); ——对引用文件进行了调整,见“2 引用文件”; ——术语,增加了“3.3定性PCR仪”、“3.4定量PCR仪”、“3.5 即时快速PCR仪”, 见“3 术语”; ——概述,对PCR仪的种类进行了修改,修改为包括定性PCR仪、定量PCR仪、即时快速PCR仪三类,见“4 概述”; ——计量性能,增加了“温度波动度”、“荧光强度重复性”、“荧光强度均匀度”、 “荧光强度线性”、“样本区分度”计量性能项目,增加了计量特性指标,见“5 计量特性和表1”; ——温度校准装置,温度传感器的数量建议修改为“ 由若干个(1个、4个、8个、 12个、16个)”,增加了“采集频率≥1次/秒,分辨力≤0.01 °C”,见“6.1.1温度校准装置”; ——标准物质,特性量值范围进行了修改,增加了“荧光强度重复性、均匀度和线性校准用标准物质或参比物质及其要求”,见“6.1.2 标准物质”; ——温度示值误差、温度均匀度和波动度,修改了探头数量和排布建议,增加了温度波动度的校准方法,见“7.3 温度均匀度和波动度和附录A ”; ——荧光检测性能,增加了荧光性能校准部分,见“7.5 荧光检测性能”; ——样本区分度的计算,增加了样本区分度的计算部分,见“7.6.6 样本区分度的计算”。 本规范的历次版本发布情况: ——JJF1527-2015 全国生物计量技术委员会 JJF1527——202× 4 聚合酶链反应分析仪(PCR仪)校准规范 1 范围本规范适用于模块加热的PCR仪计量性能的校准,对于其它类型的PCR仪,可参照本规范执行。 2 引用文件本规范引用了下列文件: GB/T 6682-2008 分析实验室用水国家标准 GB/T 42753-2023 《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》 YY/T 1173-2010 聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件, 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。 3 术语 3.1 聚合酶链反应polymerase Chain Reaction ,PCR [YY/T1173-2010 3.1] 一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法,由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。 3.2 聚合酶链反应分析仪polymerase Chain Reaction Analyzer [YY/T1173-2010 3.2] 基于PCR技术原理,模拟DNA或RNA的复制过程,在模板、引物、聚合酶等存在的条件下,特异扩增已知序列,对其进行检测分析的仪器设备。 3.3 定性PCR 仪 qualitative polymerase chain reaction analyzer 基于PCR技术原理,模拟DNA或RNA的复制过程,在模板、引物、聚合酶等存在的条件下,特异扩增已知序列,定性分析靶核酸片段的装置。 3.4 定