GB 31657.11-2025

. ５􀆰１􀆰５ 无水硫酸镁(MgSO４). ５􀆰１􀆰６ 无水硫酸钠(Na２SO４). ５􀆰１􀆰７ 红霉素A(英文名:ErythromycinA,分子式:C３７H６７NO１３,CAS号:１１４Ｇ０７Ｇ８)、脱水红霉素A(英文名:AnhydroerythromycinA,分子式:C３７H６５NO１２,CAS号:２３８９３Ｇ１３Ｇ２),纯度均≥９９􀆰０％. ５􀆰２ 溶液配制 ５􀆰２􀆰１ ０􀆰１％甲酸溶液:取１mL甲酸,用水稀释至１０００mL. ５􀆰２􀆰２ 红霉素A 及其降解物混合标准储备溶液(１mg/mL):分别准确称取１０mg(精确至０􀆰０１mg)的红霉素A、脱水红霉素A,用甲醇溶解并定容至１０mL,混匀.－１８℃避光保存,有效期３个月. ５􀆰２􀆰３ 红霉素A 及其降解物混合标准工作液(１０μg/mL):精密量取０􀆰１mL标准储备溶液用甲醇稀释􀆰 ５􀆰３ 材料 ５􀆰３􀆰１ NＧ丙基Ｇ乙二胺(PSA):４０μm~６０μm. ５􀆰３􀆰２ 有机系滤膜:０􀆰２μm. １ GB３１６５７􀆰１１—２０２５ ６ 仪器设备 ６􀆰１ 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI). ６􀆰２ 天平:感量０􀆰０１mg和０􀆰０１g. ６􀆰３ 高速离心机:转速不低于１００００r/min. ７ 试样的制备与保存 a) 蜂蜜:将样品(若有结晶,低于４５℃水浴融化)搅拌均匀,取０􀆰５kg置于样品瓶中,４℃密封保存. b) 蜂王浆:将样品室温解冻并搅拌均匀,取０􀆰５kg置于样品瓶中,－１８℃冷冻保存. ８ 试验步骤 ８􀆰１ 试样溶液的制备称取蜂蜜试料(５±０􀆰０５)g、蜂王浆试料(２±０􀆰０２)g分别置于５０mL 离心管中,加入５mL 水,涡旋 ３０s,再加入１０mL乙腈,于超声波清洗器中超声１０min,加入４g无水MgSO４和１gNaCl,涡旋１min, ９０００r/min离心１０min,取５mL上清液,用４００mgPSA 和１２００mgMgSO４净化,涡旋３０s,８０００r/min 离心５min后取上清液过０􀆰２２μm 滤膜到样品瓶中,LCＧMS/MS测定. ８􀆰２ 基质匹配混合标准系列溶液的制备精密量取混合标准工作液适量,分别加入经提取和净化的蜂蜜或蜂王浆空白试料提取溶液中,４０℃水浴氮气吹干,加入乙腈涡旋溶解残余物,配制成浓度为２ng/mL、１０ng/mL 、２５ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL 的基质匹配系列混合标准溶液,微孔滤膜过滤,供液相色谱串联质谱测定.以待测物的峰面积为纵坐标、 相应的标准溶液浓度为横坐标,绘制基质匹配标准曲线,计算回归方程和相关系数. ８􀆰３ 测定 ８􀆰３􀆰１ 液相色谱参考条件 a) 色谱柱:C１８,柱长１００mm,内径３􀆰０mm,粒度２􀆰７μm 或性能相当者; b) 流动相:A 为０􀆰１％甲酸溶液(５􀆰２􀆰１),B为甲醇(５􀆰１􀆰１),梯度洗脱程序参见表１: c) 流速:０􀆰３mL/min; d) 进样量:２μL; e) 柱温:３０℃. 表１ 梯度洗脱程序时间,min A,％ B,％ ０ ５５ ４５ １ ４０ ６０ ４ ２５ ７５ ５ ２ ９８ ７ ２ ９８ ７􀆰１ ５５ ４５ ９􀆰０ ５５ ４５ ８􀆰３􀆰２ 质谱参考条件质谱参考条件如下: a) 离子源:电喷雾离子源; b) 扫描方式:正离子模式(ESI＋); c) 干燥气温度:２５０℃; d) 干燥器流速:１５L/min; e) 毛细管电压:３５００V; ２ GB３１６５７􀆰１１—２０２５ f) 定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞能量和保留时间见表２. 表２ 红霉素A及降解物的定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞能量和保留时间化合物母离子 m/z 子离子 m/z 碎裂电压 V 碰撞能量 eV 保留时间 min 红霉素A ７３４􀆰５ １５８ ∗ ３８０ ３０ ５７６ ３８０ １４ ４􀆰０１ 脱水红霉素A ７１６ ５５８ ∗ ３８０ １４ １５８ ３８０ ３０ ４􀆰２４ 注:∗为定量离子对. ８􀆰３􀆰３ 测定法 ８􀆰３􀆰３􀆰１ 定性测定在相同试验条件下,试样溶液中红霉素类药物的保留时间与基质匹配标准溶液中对应的保留时间的偏差在±０􀆰１min以内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质匹配标准溶液中对应的定性离子的相对丰度一致,其允许偏差为±４０％. ８􀆰３􀆰３􀆰２ 定量测定分别取适量试样溶液和相应浓度的基质匹配标准工作液,作单点校准或多点校准,以色谱峰峰面积积分值定量.基质匹配标准工作液及试样液中药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内.对于试料中目标物残留量超过仪器测定线性范围的,应稀释后使目标物的响应在仪器线性范围内.在上述色谱质谱条件下,红霉素A 及其降解物混合标准溶液的定量离子色谱图见附录A. ８􀆰４ 空白试验取空白试样,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作. ９ 试验数据处理试样中红霉素类药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算. X＝Cs×A×V×１０００ As×m×１０００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: X ———试样中相应的红霉素类药物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg); Cs ———基质匹配标准溶液中相应的红霉素类药物浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL); As ———基质匹配标准溶液中相应的红霉素类药物峰面积; A ———试样中相应的红霉素类药物峰面积; V ———溶解残留物溶液体积的数值,单位为毫升(mL); m ———试料质量的数值,单位为克(g); １０００———换算系数. 注:计算结果以平行测定结果的算术平均值表示,保留３位有效数字. １０ 方法的灵敏度、正确度和精密度 １０􀆰１ 灵敏度本方法在蜂蜜和蜂王浆中的检出限为５μg/kg,定量限为１０μg/kg. １０􀆰２ 正确度本方法１０μg/kg~５０μg/kg添加浓度范围内,红霉素A 及降解物在蜂蜜和蜂王浆中的回收率为 ７０％~１２０％. １０􀆰３ 精密度本方法的批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤２０％. ３ GB３１６５７􀆰１１—２０２５ 附录 A (资料性) 红霉素A及其降解物混合标准溶液的定量离子色谱图红霉素A 及其降解物混合标准溶液(１０μg/L)的定量离子色谱图见图A􀆰１. 图A􀆰１ 红霉素A及其降解物混合标准溶液(１０μg/L)的定量离子色谱图 ４