GB 31658.38-2026

:色谱纯. 5􀆰1􀆰5 酸性氧化铝(100目~200目). 5􀆰1􀆰6 无水碳酸钠(Na2CO3). 5􀆰1􀆰7 盐酸(HCl). 5􀆰1􀆰8 氢氧化钠(NaOH). 5􀆰1􀆰9 βG盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶:100000unit/mL. 5􀆰2 标准品 βG群勃龙、诺龙、勃地酮、雄烯二酮、睾酮、雄烯醇酮、美雄酮、甲睾酮、甲氢睾酮、左炔诺孕酮、孕酮、康力龙、丙酸诺龙、氟甲睾酮、达那唑、丙酸睾酮、醋酸甲羟孕酮、苯丙酸诺龙标准品:纯度≥95􀆰0%,见附录A. D3G甲睾酮、D9G孕酮、D3G睾酮标准品:纯度≥90􀆰0%. GB31658􀆰38—2026 5􀆰3 溶液配制 5􀆰3􀆰1 10%碳酸钠溶液:称取10g无水碳酸钠,加水溶解并稀释至100mL,混匀. 5􀆰3􀆰2 盐酸溶液(2􀆰0mol/L):取盐酸18mL,加水至100mL,混匀. 5􀆰3􀆰3 氢氧化钠溶液(2􀆰0mol/L):取氢氧化钠80g,加水溶解并稀释至1000mL,混匀. 5􀆰3􀆰4 40%甲醇溶液:取甲醇40mL,加水至100mL,混匀. 5􀆰3􀆰5 50%酸化乙腈溶液:取乙腈500mL,加甲酸2mL,混匀后,加水至1000mL,混匀. 5􀆰4 标准溶液制备 5􀆰4􀆰1 标准储备液(1􀆰0mg/mL):准确称取18种激素类药物标准品(折合目标化合物)约10mg,精确至 0􀆰01mg,分别置不同10mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,分别配制成1􀆰0mg/mL标准储备液.-18°C以下避光保存,有效期6个月. 5􀆰4􀆰2 内标储备液(1􀆰0mg/mL):准确称取3种氘代内标标准品(折合目标化合物)约10mg,精确至 0􀆰01mg,分别置不同10mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,分别配制成1􀆰0mg/mL内标储备液.-18°C以下避光保存,有效期6个月. 5􀆰4􀆰3 混合标准中间液(1􀆰0μg/mL):分别吸取18种激素类药物的标准储备液适量,置同一100mL 棕色容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,混匀,使之成1􀆰0μg/mL 的混合标准中间液.4°C避光保存,有效期3 个月. 5􀆰4􀆰4 混合内标中间液(1􀆰0μg/mL):分别吸取3种内标储备液适量,置同一100mL 棕色容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,混匀,使之成1􀆰0μg/mL的混合内标中间液.4°C避光保存,有效期3个月. 5􀆰4􀆰5 混合标准曲线工作溶液:分别吸取适量的混合标准中间液及混合内标中间液,用50%酸化乙腈溶液稀释成浓度为3􀆰0μg/L、5􀆰0μg/L、25􀆰0μg/L、50􀆰0μg/L、100􀆰0μg/L和500􀆰0μg/L的混合标准工作溶液,临用新配. 5􀆰5 材料 5􀆰5􀆰1 C18固相萃取柱:十八烷基硅胶填料,500mg/6mL;或性能相当的萃取柱. 5􀆰5􀆰2 针头式过滤器通用型滤膜:尼龙材质,孔径0􀆰22μm 或性能相当者。

6 仪器设备 6􀆰1 液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源. 6􀆰2 分析天平:感量为0􀆰01g和0􀆰00001g. 6􀆰3 离心机:最高转速不低于10000r/min. 6􀆰4 固相萃取装置. 6􀆰5 涡旋振荡器. 6􀆰6 涡旋混合器. 6􀆰7 氮吹仪. 6􀆰8 酸度计. 6􀆰9 隔水式培养箱. 6􀆰10 匀浆机。

7 试样的制备与保存 7􀆰1 试样的制备 7􀆰1􀆰1 动物组织取适量新鲜或解冻的供试或空白组织绞碎,并使均质. a) 取均质的供试样品,作为供试试样; GB31658􀆰38—2026 b) 取均质的空白样品,作为空白试样; c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样. 7􀆰1􀆰2 鸡蛋取适量新鲜的供试或空白鸡蛋,去壳,并使均质. a) 取均质的供试样品,作为供试试样; b) 取均质的空白样品,作为空白试样; c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样. 7􀆰1􀆰3 生鲜乳取适量新鲜或冷藏的供试或空白生鲜乳,混合均匀. a) 取均质的供试样品,作为供试试样; b) 取均质的空白样品,作为空白试样; c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样. 7􀆰1􀆰4 奶粉取适量的供试或空白奶粉,混合均匀. a) 取均质的供试样品,作为供试试样; b) 取均质的空白样品,作为空白试样; c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样. 7􀆰1􀆰5 动物尿液取适量新鲜或冷藏的供试或空白动物尿液,混合均匀.如有混浊,离心后取上清液. a) 取备用试样,作为供试试样; b) 取空白试样,作为空白试样; c) 取空白试样,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样. 7􀆰2 试样的保存奶粉常温保存,其余试料-18°C以下保存,3个月内进行分析检测。

8 测定步骤 8􀆰1 提取 8􀆰1􀆰1 动物性食品试料(动物组织、鸡蛋、生鲜乳、奶粉) 称取试料(5±0􀆰05)g,置50mL离心管中,加入20μL混合内标中间液,加入叔丁基甲醚15mL,涡旋混匀30s,加入10%碳酸钠溶液3mL,振荡提取10min,5000r/min离心10min,将上清液转移至另一50mL离心管中.残渣用叔丁基甲醚15mL重复提取1次,合并上清液,备用. 8􀆰1􀆰2 动物尿液试料移取试样(5±0􀆰05)mL,置于50mL离心管中,加入20μL混合内标中间液,用2􀆰0mol/L盐酸溶液或2􀆰0mol/L氢氧化钠溶液调节pH 至7􀆰0左右,加入βG盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶50μL,37􀆰0°C 酶解16h,取出冷却至室温后,10000r/min离心5min,取上清液,备用. 8􀆰2 净化 8􀆰2􀆰1 动物性食品试料(动物组织、鸡蛋、生鲜乳、奶粉) 取全部上清液,于40°C水浴条件下,氮气吹干.用50%酸化乙腈溶液1􀆰0mL溶解残余物,加入酸性氧化铝0􀆰2g,涡旋混匀后,10000r/min离心5min.取上清液,经0􀆰22μm 滤膜过滤,供液相色谱串联质谱测定. 8􀆰2􀆰2 动物尿液试料 C18固相萃取柱依次用甲醇5mL 和水5mL 活化,取全部上清液过柱,控制流速在1􀆰0mL/min以下,用40%甲醇溶液5mL淋洗,抽干.用8mL甲醇洗脱,收集全部洗脱液,抽干,于40°C水浴条件下, 氮气吹干,用50%酸化乙腈溶液1􀆰0mL溶解残余物,涡旋混匀后,用0􀆰22μm 滤膜过滤,供液相色谱串 GB31658􀆰38—2026 联质谱测定. 8􀆰3 标准工作曲线的制备精密量取适量的混合标准中间液及混合内标中间液,用50%酸化乙腈溶液稀释成浓度为3􀆰0μg/L、 5􀆰0μg/L、25􀆰0μg/L、50􀆰0μg/L、100􀆰0μg/L和500􀆰0μg/L的系列混合标准液,上机测定.以定量离子对峰面积为纵坐标、标样浓度与内标浓度比值为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数. 8􀆰4 测定 8􀆰4􀆰1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱:C18色谱柱(150mm×2􀆰1mm,3􀆰5μm)或相当者; b) 流动相:A 为0􀆰2%甲酸溶液,B为乙腈,梯度洗脱程序见表1; 表1 流动相梯度洗脱条件时间 min A % B % 0 60 40 5􀆰0 5 95 10􀆰0 5 95 10􀆰1 60 40 20􀆰0 60 40 c) 流速:0􀆰3mL/min; d) 柱温:30°C; e) 进样量:10μL. 8􀆰4􀆰2 质谱参考条件 a) 离子源:电喷雾离子源(ESI); b) 扫描方式:正离子模式; c) 检测方式:多反应离子监测(MRM); d) 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气; e) 去簇电压、碰撞室入口电压、碰撞能量、碰撞室出口电压应优化至最佳灵敏度; f) 定性离子对、定量离子对、对应的去簇电压及碰撞能量参考值见表2. 表2 化合物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量的参考值化合物定性离子对 m/z 定量子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 康力龙 329􀆰2>81􀆰0 329􀆰2>121􀆰1 329􀆰2>81􀆰0 121 85 50 睾酮 289􀆰2>97􀆰1 289􀆰2>109􀆰1 289􀆰2>97􀆰1 121 27 33 雄烯二酮 287􀆰3>97􀆰1 287􀆰3>109􀆰1 287􀆰3>97􀆰1 85 30 30 甲睾酮 303􀆰1>109􀆰0 303􀆰1>97􀆰1 303􀆰1>109􀆰0 100 39 39 苯丙酸诺龙 407􀆰3>105􀆰1 407􀆰3>257􀆰2 407􀆰3>105􀆰1 125 53 24 醋酸甲羟孕酮 387􀆰1>327􀆰3 387􀆰1>285􀆰4 387􀆰1>327􀆰3 95 25 25 丙酸睾酮 345􀆰2>97􀆰1 345􀆰2>109􀆰1 345􀆰2>97􀆰1 106 31 44 勃地酮 287􀆰1>121􀆰1 287􀆰1>135􀆰2 287􀆰1>121􀆰1 90 27 27 GB31658􀆰38—2026 表2(续) 化合物定性离子对 m/z 定量子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 左炔诺孕酮 313􀆰3>109􀆰1 313􀆰3>245􀆰2 313􀆰3>109􀆰1 80 40 22 甲氢睾酮 305􀆰2>269􀆰3 305􀆰2>173􀆰2 305􀆰2>269􀆰3 100 20 35 βG群勃龙 271􀆰2>199􀆰2 271􀆰2>253􀆰2 271􀆰2>199􀆰2 84 32 28 诺龙 275􀆰2>109􀆰1 275􀆰2>257􀆰2 275􀆰2>109􀆰1 98 36 24 丙酸诺龙 331􀆰2>109􀆰1 331􀆰2>145􀆰2 331􀆰2>109􀆰1 123 35 32 雄烯醇酮 291􀆰1>255􀆰3 291􀆰1>273􀆰2 291􀆰1>255􀆰3 80 20 14 达那唑 338􀆰3>91􀆰0 338􀆰3>310􀆰3 338􀆰3>91􀆰0 100 80 27 孕酮 315􀆰3>97􀆰0 315􀆰3>109􀆰0 315􀆰3>97􀆰0 86 29 31 美雄酮 301􀆰3>121􀆰1 301􀆰3>283􀆰4 301􀆰3>121􀆰1 90 35 35 氟甲睾酮 337􀆰3>241􀆰4 337􀆰3>131􀆰3 337􀆰3>241􀆰4 80 30 40 D3G甲睾酮 306􀆰1>109􀆰0 306􀆰1>109􀆰0 100 39 D9G孕酮 324􀆰4>100􀆰1 324􀆰4>100􀆰1 80 28 D3G睾酮 292􀆰2>97􀆰1 292􀆰2>97􀆰1 121 27 8􀆰4􀆰3 测定法 8􀆰4􀆰3􀆰1 定性测定在同样测试条件下,试样溶液中同化激素类药物的保留时间与相应内标物保留时间的比值与标准溶液中相应组分的保留时间与相应内标物保留时间的比值相对偏差在1%之内,且样品中各组分的离子相对丰度与浓度接近的标准溶液的相对丰度一致,其允许偏差为±40%,则可判定为样品中存在对应的待测物. 8􀆰4􀆰3􀆰2 定量测定取试样溶液与相应的标准溶液,作单点或多点校准,按内标法定量(康力龙、睾酮、勃地酮、βG群勃龙、 诺龙、美雄酮和氟甲睾酮用D3G睾酮校准;雄烯二酮、甲睾酮、左炔诺孕酮和雄烯醇酮用D3G甲睾酮校准;苯丙酸诺龙、醋酸甲羟孕酮、丙酸睾酮、甲氢睾酮、丙酸诺龙、达那唑和孕酮用D9G孕酮校准).试样溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.对于试料中同化激素类药物残留量超过仪器测定线性范围的,在提取时根据药物浓度相应增加内标工作液的添加量,使试样溶液稀释后药物的响应值在仪器线性范围内,对应内标浓度与标准溶液中的内标浓度一致.在上述色谱质谱条件下,鸡蛋添加样品多反应监测色谱图见附录B. 8􀆰5 空白试验取空白试样,采用相同的测定步骤进行平行操作。

9 结果计算试料中目标药物的残留量按标准曲线或公式(1)计算. ω=ρS ×ρiS ×Ai ×A′iS ×V ×1000 ρ' iS ×AS ×AiS ×m ×1000 (1) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: GB31658􀆰38—2026 ω ———试样中目标药物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg)或微克每升(μg/L); ρS ———标准工作溶液中目标药物浓度的数值,单位为微克每升(μg/L); ρiS ———试样溶液中相应同位素内标浓度的数值,单位为微克每升(μg/L); Ai ———试样溶液中目标药物峰面积; A′iS ———标准工作溶液中相应同位素内标峰面积; V ———最终定容体积的数值,单位为毫升(mL); ρ′ iS ———标准工作溶液中相应同位素内标浓度的数值,单位为微克每升(μg/L); AS ———标准工作溶液中目标药物峰面积; AiS ———试样溶液中相应同位素内标峰面积; m ———试样质量或体积的数值,单位为克(g)或毫升(mL); 1000———换算系数. 注:计算结果不小于1μg/kg的保留3位有效数字,1μg/kg以下保留至小数点后2位。

10 方法灵敏度、正确度和精密度 10􀆰1 灵敏度本方法在猪、羊、牛、鸡组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪),鸡蛋,牛奶,羊奶,奶粉及动物尿液(猪、牛、羊)中 18种同化激素的检出限为0􀆰5μg/kg(μg/L),定量限为1􀆰0μg/kg(μg/L). 10􀆰2 正确度本方法在猪、羊、牛、鸡组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪),鸡蛋,牛奶,羊奶,奶粉及动物尿液(猪、牛、羊) 中,18种同化激素在1􀆰0μg/kg(μg/L)、2􀆰0μg/kg(μg/L)、10􀆰0μg/kg(μg/L)3个添加浓度的回收率在 60%~120%. 10􀆰3 精密度本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤20%. GB31658􀆰38—2026 附录 A (规范性) 18种同化激素类化合物信息 18种同化激素类化合物的中英文通用名称、CAS号、化学分子式和相对分子质量见表A􀆰1. 表A􀆰1 18种同化激素类化合物的中英文通用名称、CAS号、化学分子式和相对分子质量序号中文通用名称英文通用名称 CAS号化学分子式相对分子质量 1 甲氢睾酮 Mesterolone 1424G00G6 C20H32O2 304􀆰47 2 雄烯醇酮 Stanolone 521G18G6 C19H30O2 290􀆰45 3 甲睾酮 17GMethytestosterone 58G18G4 C20H30O2 302􀆰46 4 康力龙 Stanozolol 10418G03G8 C21H32N2O 328􀆰49 5 丙酸睾酮 Testosteronepropionate 57G85G2 C22H32O3 344􀆰50 6 βG群勃龙 βGTrenbolone 10161G33G8 C18H22O2 270􀆰37 7 诺龙 Nandrolone 434G22G0 C18H26O2 274􀆰40 8 苯丙酸诺龙 Nandrolonephenylpropionate 62G90G8 C27H34O3 406􀆰57 9 达那唑 Danazol 17230G88G5 C22H27NO2 337􀆰46 10 睾酮 Testosterone 58G22G0 C19H28O2 288􀆰43 11 丙酸诺龙 Nandrolone17Gpropionate 7207G92G3 C21H30O3 330􀆰46 12 雄烯二酮 Androstenedione 63G05G8 C19H26O2 286􀆰41 13 左炔诺孕酮 Levonorgestrel 797G63G7 C21H28O2 312􀆰45 14 孕酮 Progesterone 57G83G0 C21H30O2 314􀆰46 15 醋酸甲羟孕酮 Medroxyprogesterone17Gacetate 71G58G9 C24H34O4 386􀆰52 16 勃地酮 Boldenone 846G48G0 C19H26O2 286􀆰41 17 美雄酮 Metandienone 72G63G9 C20H28O2 300􀆰44 18 氟甲睾酮 Fluoxymesterone 76G43G7 C20H29FO3 336􀆰44 GB31658􀆰38—2026 附录 B (资料性) 鸡蛋添加样品液相色谱串联质谱多反应监测(MRM)色谱图鸡蛋添加样品液相色谱串联质谱多反应监测(MRM)色谱图见图B􀆰1. 图B􀆰1 鸡蛋添加样品MRM 色谱图(1􀆰0μg/kg) GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 0 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 1 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 2 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 3 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 4 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 5 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 6 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 7 GB31658􀆰38—2026 图B􀆰1(续) 8